|
好對唔住, super兄, 小弟本來想用中文translate佢篇野, 點知我打字打得慢, 打左好耐, 點知文章已被封鎖, reply唔到......我唔想waste左我一番心機, 請俾我o係度post啦! (我都覺得果條友o係度賣廣告, 但我想這個dna抽取法有可能是真的, 可能佢都係從另一個網copy and paste落黎!)
我都唔係讀Micromolecular biotechnology或 translate, 所以其實我都唔係明晒d steps! 我嘗試下解釋一下啦, 唔好捉我文法同生字錯, 但有錯請指正!!
用cut-off blue tips(<---儀器)拿大約5mg的鯛魚組織作實驗(最多25mg), 加300µl(300X10-6L)的緩衝劑(100mM Tris 9, 100mM EDTA, 1% SDS); 用一支1.5ml-5mlo既管輕微地把壓那組織(最好用側面壓, 唔好用底部)!
放d野去大約70度o既地方(我諗係70°Cwater bath OR 衡溫櫃)培育20至30分鐘!
加42µl(<---量)的8M(<---濃度)potassium acetate(chemicals...唔知中文係乜), 用tip攪混1分鐘, 放在冰上30分鐘(pH應該正確, 唔駛理), 在4°C 的情況下旋轉支野最少15分鐘(<---我諗係用離心機),(<---到時支野應該分成兩層, 一層係清澈o既液體, 另一層應該是有顏色的一粒半液體) 立即把浮面清澈的液體用cut-off tip抽出, 放到另一支新管(如果唔能夠立即抽出, 液體裡面d野會溶番落粒半液體度!!) 最好唔好抽到粒白色o既半液體!
攪混, 重覆做5次, 直至冇粒半液體(每次5分鐘);
加大約350µl的isopropanol(chemicals...唔知中文係乜), 在RT(<---唔知係乜, 我估係類似Separating funnel o既儀器)用倒轉的方法混合它們, 共20次, 在RT停留15分鐘, 再旋轉5分鐘, 之後唔要d清澈的液體(在這時, 應有20µl 的液體和粒狀半液體........)唔好用pipette tip攪粒狀半液體!
加入350µl 70%濃度的EtOH(<---酒精), 輕拍混合, 旋轉5分鐘, 抽走清澈的液體; 到這時, 可以用70%濃度的EtOH洗一洗, 再用20至40 µL TE 或水...
在冰上, 加500µl的10% EtOH, 停留在4°C直至粒半液體溶化或o'n(<--唔知係乜). 旋轉5分鐘, 抽出450µl的清澈液體, 加50µl 3M NaOAc 和1ml abs EtOH, 停留在 -70°C低溫下30分鐘使DNA沈澱, 旋轉5分鐘, 抽走d清澈液體!
加350µl 70% EtOH, 輕拍混合, 旋轉5分鐘, 抽走d清澈液體; 再旋轉20秒, 再拿走EtOH(<---我估蒸發); 在冰上, 加50µl EtOH, 停留在o'n 4°C, 輕拍;
用0.5-1%200µl volume for 50µl PCR reaction(polymer chain reaction)[<---用黎找出DNA的排列次序];同50%緩衝劑去check在瓊脂醣凝膠上!
最後由 GoHan 於 2003-06-18 00:24 編輯，總共編輯了 2 次。
|
登入
註冊
問答集
don't take it too serious!
